質(zhì)量光度計(jì)基于光散射原理，當(dāng)一束激光照射到溶液中的生物大分子或復(fù)合物時(shí)，這些顆粒會(huì)使光線發(fā)生散射。通過測(cè)量散射光的強(qiáng)度和角度分布，可以獲得有關(guān)顆粒的質(zhì)量、大小和形狀等信息。與傳統(tǒng)的光散射技術(shù)不同，質(zhì)量光度計(jì)能夠直接測(cè)量單個(gè)顆粒的散射光，從而避免了ensemble-averaging效應(yīng)，提供了更詳細(xì)和準(zhǔn)確的分子信息。

 

操作流程

 

樣品準(zhǔn)備：將待分析的生物大分子或復(fù)合物溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，確保樣品的濃度和純度符合要求。通常需要對(duì)樣品進(jìn)行過濾或離心等預(yù)處理，以去除雜質(zhì)和聚集體。

 

儀器校準(zhǔn)：使用已知質(zhì)量和大小的標(biāo)準(zhǔn)顆粒對(duì)質(zhì)量光度計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保儀器測(cè)量的準(zhǔn)確性和可靠性。校準(zhǔn)過程包括調(diào)整激光功率、探測(cè)器靈敏度和角度校準(zhǔn)等步驟。

 

樣品測(cè)量：將樣品溶液注入樣品池中，啟動(dòng)激光光源，使光線照射樣品。散射光檢測(cè)系統(tǒng)會(huì)測(cè)量不同角度下的散射光強(qiáng)度，并將數(shù)據(jù)傳輸?shù)綌?shù)據(jù)采集和處理系統(tǒng)。

 

數(shù)據(jù)分析：使用質(zhì)量光度計(jì)配套的軟件對(duì)采集到的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。軟件會(huì)根據(jù)散射光的強(qiáng)度和角度分布，通過特定的算法計(jì)算出樣品中顆粒的質(zhì)量、大小和形狀等參數(shù)。可以繪制質(zhì)量分布曲線、粒徑分布曲線等，以直觀地展示樣品的組成和特性。

 

優(yōu)缺點(diǎn)

 

優(yōu)點(diǎn)

 

單顆粒分析：能夠直接測(cè)量單個(gè)顆粒的散射光，提供了關(guān)于生物大分子和復(fù)合物的個(gè)體信息，避免了ensemble-averaging效應(yīng)，對(duì)于異質(zhì)性樣品的分析尤為重要。

 

無(wú)需標(biāo)記：不需要對(duì)樣品進(jìn)行熒光或放射性標(biāo)記，避免了標(biāo)記過程對(duì)樣品結(jié)構(gòu)和功能的影響，同時(shí)也簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作流程。

 

快速準(zhǔn)確：測(cè)量速度快，能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得大量顆粒的信息，并且具有較高的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

 

多參數(shù)分析：可以同時(shí)獲得顆粒的質(zhì)量、大小和形狀等多個(gè)參數(shù)，為全面了解生物大分子和復(fù)合物的特性提供了豐富的信息。

 

缺點(diǎn)

 

樣品要求高：樣品需要具有較高的純度和均一性，否則雜質(zhì)和聚集體會(huì)干擾測(cè)量結(jié)果。對(duì)于一些復(fù)雜的生物樣品，可能需要進(jìn)行繁瑣的純化和預(yù)處理步驟。

 

儀器成本高：質(zhì)量光度計(jì)是一種精密的儀器，設(shè)備成本較高，維護(hù)和運(yùn)行費(fèi)用也相對(duì)較高，限制了其在一些實(shí)驗(yàn)室的廣泛應(yīng)用。

 

數(shù)據(jù)分析復(fù)雜：散射光數(shù)據(jù)的分析需要使用專門的軟件和算法，對(duì)于復(fù)雜樣品的分析可能需要一定的專業(yè)知識(shí)和經(jīng)驗(yàn)。